Laiveko.ru

Медицина и здоровье
0 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Научная статья по теме КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА CD4; CD25 BRIGHT РЕГУЛЯТОРНЫХ Т-ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ Биология

научная статья по теме КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА CD4+CD25 BRIGHT РЕГУЛЯТОРНЫХ Т-ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ Биология

КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА CD4+CD25 BRIGHT РЕГУЛЯТОРНЫХ Т-ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ - тема научной статьи по биологии из журнала Российский иммунологический журнал

Текст научной статьи на тему «КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА CD4+CD25 BRIGHT РЕГУЛЯТОРНЫХ Т-ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ»

КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА CD4+CD25вright РЕГУЛЯТОРНЫХ Т-ЛИМФОЦИТОВ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ

© 2007 Д.С. Сибиряк1, С.В. Сибиряк1, Р.Ш. Юсупова2, Н.Н. Курчатова2, В.А. Черешнев1

1 Институт иммунологии и физиологии УрОРАН, Екатеринбург, Россия; 2 ГУЗ ВЦГПХ МЗ РФ, Уфа, Россия

Поступила: 17.01.07 г. Принята: 02.04.07 г.

Оценено содержание CD4+CD25Bгigth естественных регуляторных Т лимфоцитов (Трег) в периферической крови 46 условно-здоровых доноров — добровольцев (18 мужчин и 28 женщин) различных возрастных групп (20 — 40 лет, 41—60 лет и более 61 года). Содержание CD4+CD25Bгigth Трег среди всей популяции CD3 + T лимфоцитов составило (M±SD) 1,45±0,59%, среди популяции CD3 + CD4+ лимфоцитов 3,30±1,39% и 7,00±3,01% среди популяции CD4+CD25Total клеток. Процентное содержание Трег имеет тенденцию к снижению у женщин и пожилых лиц; доля CD4+CD25Bгight Трег лимфоцитов как среди всей популяции CD3 + CD4+ клеток, так и среди CD4+CD25+ лимфоцитов значимо ниже; абсолютное содержание CD4+CD25Bгight Трег клеток ниже у женщин.

Ключевые слова: регуляторные Т-лимфоциты, фенотип

Последние годы характеризуются резким нарастанием интереса к супрессорным популяциям Т-лимфоцитов, а число публикаций, посвященных этой проблеме, лавинообразно нарастает. Супрессорные Т-лимфоциты обеспечивают контроль периферической толерантности, ограничивают «коллатеральное повреждение» собственных тканей и осуществляют «негативную регуляцию» иммунного ответа, и разделяются на две группы: индуцированные и естественные (конституитивные) супрессоры. Индуцируемые супрессоры появляются в процессе иммунного ответа и анти-генспецифичны ^а-1-рестриктированные С08+СВ28- Т супрессоры, 1Ь-10-продуциру-ющие СБ4+СБ25- Тг1 и TGFP-продуцирую-щие СБ4+СБ25- ТкЭ лимфоциты). Естественные Т супрессоры ^КТ лимфоциты и СБ4+СБ25+ Т-регуляторные лимфоциты) формируются в ходе онтогенеза иммунной системы [8, 9]. Так, СБ4+СБ25+ Т-регуляторные лимфоциты (Трег) достигают в тимусе конечной стадии дифференцировки, поступают в кровь, заселяют лимфоидные органы, ре-циркулируют, способны к направленной

миграции в очаги воспаления, опухолевую ткань, трансплантаты [23], будучи одним из связующих звеньев между адаптивными и врожденными механизмами иммунитета. Стимулом для индукции антиген-неспецифической супрессорной активности Трег, является появление активированных СБ4+ хелпе-ров и контакт с ними [8, 16], однако тонкие механизмы инициации и реализации супрессорной активности пока не ясны. Фенотипи-чески СБ4+СБ25+ Трег характеризуются кон-ституитивно высоким уровнем экспрессии а-цепи рецептора к 1Ь-2 (CD4+CD25Bгight) [16]. Для CD4+CD25+ Трег лимфоцитов типична экспрессия и ряда других антигенов, — CD122 (а-цепь рецептора к 1Ь-2), GITR, СТЬА-4, CD62L, ТЬИ4, CD134, CD45RO, которые, однако, не являются уникальными для этих клеток [16, 18]. Супрессорная активность обусловлена наличием в Трег лимфоцитах транскрипционного фактора скурфина, продукта гена FoxP3 [7, 10], мутация которого приводит к тяжелым аутоиммунным расстройствам («curfy» мыши или 1РЕХ синдром у человека) [24, 25]. Количественная и функциональная недостаточность Трег рассматривается в числе возможных механизмов патогенеза ряда аутоиммунных и аллергических заболеваний [6, 11, 12, 22], а избыточная активность — фактором онкогенеза [22].

Адрес: 450093 Уфа, ул. Пушкина д. 54/1 кв. 58. E-mail: srgsib@mail.ru

Идентификация «ярко светящейся» части CD25 «позитивных» CD4+ Т хелперов (CD4+ CD25Bгi9ht)r даже в условиях двухпараметриче-ского окрашивания лимфоцитов, считается достаточно адекватным и надежным методом выявления Трег [3, 5]. Нормативные значения количества CD4+CD25Bгight у здоровых лиц, представленные в публикациях различных авторов, неодинаковы. Это связано, в том числе, с различными подходами к логическому ограничению пула Трег лимфоцитов. Следует отметить, что в ряде исследований аргументируется тот факт, что показатель содержания СБ4 + СБ25В"ды Трег лимфоцитов в крови имеет диагностическое и прогностическое значение, и в ряде ситуаций может быть использован для иммунологического мониторинга [5, 12, 13, 17]. Так, к примеру, для пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой характерно резкое возрастание содержания СБ4 + СБ25В"дм Трег лимфоцитов в периферической крови, для HCV инфекции, — снижение, а при HBV инфекции и циррозе печени их содержание в крови не изменяется [13].

В настоящей работе представлена количественная характеристика содержания CD4 + CD25Bгight клеток в периферической крови условно-здоровых доноров добровольцев.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Иммунологическое обследование проведено у 46 условно-здоровых доноров, которые добровольно дали согласие на участие в нем и были поставлены в известность о цели и задачах исследования. Группа состояла из 18 мужчин и 28 женщин. Обследуемые были разделены по возрастным группам: 20 — 40 лет (18 человек), 41 — 60 лет (19 человек) и более 60 лет (9 человек). Критериями включения в обследование были: 1) отсутствие на момент обследования острых инфекционных заболеваний; 2) отсутствие, по клинико-анамнестическим данным, инфекционного, аутоиммунного, аллергического и лимфо-пролиферативного иммунопатологических синдромов. У 14% доноров отмечались в анамнезе аллергические реакции эпизодического характера (острая крапивница) на пищевые продукты, косметические средства и лекарства. В возрастных группах 41—60 лет и более 60 лет наличие сердечно-сосудистых заболеваний (гипертоническая болезнь, ИБС) не явилось критерием исключения из исследования.

Взятие крови для иммунологического обследования (пункция локтевой вены) осуществляли в утренние часы строго натощак, кровь помещали в пробирку vacutainer, содержащую №2-ЭДТА (BD).

Использован стандартный метод прямого двухпараметрического иммунофлюоресцент-ного окрашивания и протокол лизиса — фиксации клеток (CellLyse/ CellFix, BD). Для оценки популяции CD3+CD4+ Т-лимфоцитов использовали «парные» МКА антиCD3-FITC(IgG1)/антиCD4-PE(IgG1) (Immunoteck, Beckman Coulter) и соответствующий «изоти-пический» контроль (IgG1-FITC/IgG1-PE, IOTest). Для выделения границ лимфоцитар-ного региона использовали МКА антиCD45-FITC(IgG1)/антиCD14-PE(IgG1). Для идентификации CD4+ лимфоцитов, экспрессирую-щих а-цепь рецептора к IL-2, применяли FITC-меченые МКА против CD4 (IgG2a) (Caltag Lbs.) и меченые PE МКА против CD25 (IgG1) (Caltag Lbs.). Контрольные пробы инкубировали с FITC- и PE-мечеными иммуноглобулинами соответствующего изотипа (IgG2a — FITC/IgG1- PE, Caltag Lbs.).

Цитофлуорометрию осуществляли на проточном цитометре FACSCalibur (BD), при этом регистрировали суммарно не менее 10000 событий. Анализ данных осуществляли в рамках программы CellQuest (BD).

Статистическая обработка результатов произведена в рамках программного обеспечения Statistica для Windows (версия 6.0). В процессе анализа данных, в зависимости от характера распределения признака, использовали параметрические (межгрупповой критерий Стью-дента, Рт), и непараметрические (критерий Манна-Уитни, PM-U) критерии различия.

Стратегия логического ограничения (гейти-рования) CD4+CD25Bri9ht Трег

Выделение региона «ярко светящихся» CD4+CD25Bright Трег клеток среди популяции CD4+ лимфоцитов осуществляли, используя принцип, предложенный [3]. Авторы ограничивают только регион четко идентифицируемых «ярко светящихся» клеток в конце «шлейфа» CD4 CD25+ (CD4+ CD25Total) лимфоцитов (рис. 1). В отличие от предлагаемого авторами подхода (исключение «спорного региона» клеток и выделения CD4+CD25Low популяции лимфоцитов), что необходимо при сортировке клеток, всю оставшуюся популяцию CD4 + CD25+ лимфоцитов мы расценивали как «менее яркие» — CD4 + CD25Dim клетки.

Влияние на ожидаемую продолжительность жизни ВИЧ-1-положительных лиц с числом лимфоцитов CD4 + и ответа вирусной нагрузки на антиретровирусную терапию

Целью данного исследования является оценка ожидаемой продолжительности жизни ВИЧ-положительных пациентов, обусловленных ответом на антиретровирусную терапию (АРТ).

Пациенты в возрасте старше 20 лет, которые начали АРТ в 2000-2010 гг. (За исключением ПИН) в клиниках по ВИЧ, вносящих вклад в исследование CHIC в Великобритании, соблюдались для смертности до 2012 г. Мы определили последнее количество клеток CD4 + и вирусную нагрузку до АРТ и в каждый из лет 1-5 АРТ. Для каждой продолжительности АРТ таблицы смертности, основанные на оценочных показателях смертности по полу, возрасту, последнему количеству клеток CD4 + и подавлению вируса (РНК ВИЧ-1 400 копий / мл). Сокращенные таблицы жизненного цикла были построены для каждого пола по возрастным коэффициентам смертности, сгруппированным по пятилетним возрастным группам, и использовались для оценки ожидаемой продолжительности жизни в возрасте 20-85 лет. В этих таблицах описывается опыт смертности, который могут иметь гипотетические когорты ВИЧ-инфицированных, если они были подвергнуты смертности в наблюдаемый период. Ожидаемая продолжительность жизни в точном возрасте определяется как среднее количество лет, оставшихся у людей, которые выжили до указанного возраста, в зависимости от возрастных показателей смертности от всех причин в течение периода исследования. В этой статье мы представляем ожидаемый возраст смерти, а не ожидаемую продолжительность жизни, поскольку клиницисты и пациенты указали на это предпочтение. Например, если 35-летняя женщина рассчитана на 40 лет, ожидаемый возраст смерти составляет 75 лет. Основные анализы предполагаемого ожидаемого возраста при смерти [95% доверительный интервал (95% ДИ)] для каждого пола в целом и стратифицированы как достигнутым количеством лимфоцитов CD4 +, так и статусом вирусного подавления в точном возрасте 20, 35 и 50 лет. Вторичные анализы оценивали влияние на ожидаемый возраст при смерти достигнутого количества лимфоцитов CD4 +, не скорректированных для подавления вируса, и наоборот.

Мы использовали показатели смертности по признаку пола в популяции Великобритании на 2000-2009 годы, сгруппированные в 5-летние возрастные группы для оценки ожидаемой продолжительности жизни для всего населения (www.mortality.org). Ожидаемая продолжительность жизни сравнивалась для пациентов с достигнутым числом лимфоцитов CD4 + 350-499 и по меньшей мере 500 клеток / мкл. Подробная информация о расчете жизненных таблиц была опубликована ранее [2]. Мы использовали Stata версии 12 и Microsoft Excel 2008 для проведения анализов.

Исследование UK CHIC включало данные о 47 201 ВИЧ-инфицированных, из которых 22 151 начали АРТ в период с 2000 по 2010 год. Мы исключили 568 (3%) ПИН, 164 (0,7%) инфицированных через передачу от матери к ребенку, два пациента без и 29 лет в возрасте менее 20 лет, что оставило 21 388 пациентов, имеющих право на участие.

Читать еще:  Член потерял чувствительность

В таблице 1 приведены демографические и клинические характеристики пациентов при АРТ, начинающихся с пола, и доля пациентов с отсутствующими данными для каждого ковариата. Большинство пациентов 14 742/21 388 (69%) были мужчинами, и из них 10 246 (71%) были МСМ, а 9649 (67%) имели белую этническую принадлежность. Напротив, почти все женщины 6265/6646 (97%) были инфицированы гетеросексуально, а большинство 4778 (74%) были черными африканскими. Женщины были моложе мужчин с очень немногим в возрасте 60 лет и более.

В течение 110 697 человеко-лет умерли 961/21 388 (4,5%) пациентов. Коэффициент сырой смертности 9,0 на 1000 человеко-лет для мужчин (95% ДИ 8,4-9,7) был выше, чем 7,9 для женщин (7,0-8,9), но был одинаковым у обоих полов у лиц в возрасте менее 45 лет [ мужчины 6,9 (6,2-7,7); женщины 6,9 (6,0-7,9)]. Коэффициент потерь для наблюдения составил 3,9 на 100 человеко-лет. По сравнению с пациентами, оставшимися на попечении, пациенты, потерявшие контроль, чаще были мужчинами, зараженными гетеросексуальным контактом или кровью (или неизвестными), чернокожей африканской, азиатской или смешанной расы (или неизвестной), младшей, с диагнозом СПИД до начать АРТ и иметь более высокий показатель количества CD4 + в начале АРТ, хотя средний показатель количества лимфоцитов CD4 + был таким же [сохранен в интервале 214 интервала между пациентами (IQR 116-310); потеряли 210 (108-320) клеток / мкл]. Для анализа с учетом ответа на лечение в первый, второй, третий, четвертый и пятый годы после начала АРТ данные были доступны по 16 794/19 855 (85%), 15 604/17 400 (90%), 13 223/14 721 (90%), 11 032/12 201 (90%) и 9126/10 030 (91%) пациентов, которые имели соответствующие показатели количества лимфоцитов CD4 + и вирусной нагрузки в те годы и имели последующее наблюдение время.

Ожидаемый возраст смерти у ВИЧ-инфицированных мужчин от начала АРТ составил 68 (66-71), 73 (71-76) и 77 (75-80) лет в точных возрасте 20, 35 и 50 лет соответственно, по сравнению с 77 , 78 и 79 лет среди населения в целом. Соответствующий ожидаемый возраст смерти у ВИЧ-инфицированных женщин составил 69 (65-73), 74 (70-78) и 78 (73-82) года по сравнению с 81, 82 и 83 годами среди населения в целом.

Ожидаемый возраст смерти (95% ДИ) для мужчин (таблица 2) и женщин (таблица 3) показал градуированную ассоциацию с как достигнутым количеством лимфоцитов CD4 +, так и уровнем вирусного подавления. При запуске АРТ 35-летний мужчина с числом лимфоцитов CD4 + менее 200 клеток / мкл может ожидать до 71 (68-73) лет, что на 7 лет меньше, чем у мужчин в общей численности населения Великобритании. Такой пациент, который добился подавления вируса и увеличил количество клеток CD4 + в течение первого года АРТ до 200-349 или по меньшей мере 350 клеток / мкл, увеличил ожидаемый возраст смерти до 78 (74-82) или 81 (77-84) лет соответственно. Это сопоставимо с общей продолжительностью жизни мужчин в возрасте 78 лет. Через 5 лет после АРТ ожидаемый возраст смерти у 35-летних мужчин варьировался от 54 (48-61) до 80 (76-83) лет для лиц с числом лимфоцитов CD4 + менее 200 клеток / мкл и без подавления вируса против Количество клеток CD4 + составляет не менее 350 клеток / мкл и подавляется. Рисунки 1 (мужчины) и 2 (женщины) иллюстрируют, что в каждом слое подсчета клеток CD4 + ожидаемый возраст смерти выше для тех, у кого нет, у которых нет вирусного подавления.

Ожидаемый возраст смерти мужчин в возрасте 35 лет при различной продолжительности антиретровирусной терапии в соответствии с текущим числом лимфоцитов CD4 + и подавлением вируса по сравнению с общей популяцией.

Ожидаемый возраст при смерти женщин в возрасте 35 лет при различной продолжительности антиретровирусной терапии в соответствии с текущим числом лимфоцитов CD4 + и подавлением вируса по сравнению с общей популяцией.

По сравнению с мужчинами при АРТ, ожидаемый возраст смерти был от 3 до 4 лет выше для тех, кто выжил 5 лет в АРТ (таблица 2), в зависимости от их нынешнего возраста. Ожидаемая продолжительность жизни была выше для женщин, что отражает более высокую ожидаемую продолжительность жизни женщин среди населения в целом (таблица 3). Не было никакой разницы в смертности между пациентами с числом лимфоцитов CD4 + 350-499 и не менее 500 клеток / мкл для мужчин или женщин.

Средний показатель количества CD4 + клеток увеличивался с длительностью АРТ и был выше у пациентов с подавлением вируса (дополнительный показатель 1xs). Доля пациентов с числом лимфоцитов CD4 + не менее 350 клеток / мкл заметно увеличилась в первый год АРТ и продолжала увеличиваться до 5 лет на АРТ (дополнительный рисунок 2). Только у 19% пациентов было число CD4 + клеток более 350 клеток / мкл при начале АРТ, по сравнению с 79% пациентов с АРТ более 5 лет, причем 52% имели число лимфоцитов CD4 + более 500 клеток / мкл.

Показатели смертности на 1000 человеко-лет среди молодых мужчин уменьшались с увеличением количества клеток CD4 + и были ниже у пациентов с подавлением вируса. Показатели смертности в целом и ограничены для лиц в возрасте 20-44 лет, для разных продолжительности АРТ и стратифицированных по количеству CD4 + клеток и подавлению вируса, суммированы в дополнительных таблицах 4 (мужчины) и 5 ​​(женщины). Через 5 лет после АРТ уровень смертности среди молодых мужчин варьировался от 2,7 (1,7-4,3) (подавление вируса / количество лимфоцитов CD4 +) до 38,1 (21,1-68,9) (количество невосстановленных / низких CD4 + клеток). Из тех, кто умер, у 20% не было клиник, зарегистрированного за предыдущие 6 месяцев, а 11% из-за ухода более 1 года.

Вторичные анализы показывают вклад подавления вируса, не скорректированный для подсчета клеток CD4 + (дополнительная таблица 6), и количество клеток CD4 +, не скорректированное для подавления вируса (дополнительная таблица 7) для снижения средней продолжительности жизни мужчин. Через 5 лет после АРТ 20-летние мужчины, как ожидается, будут жить в среднем до 75 лет, если будут подавлены вирусом и до 59 лет без подавления. Виремия в предыдущем визите не обнаруживалась у 88% пациентов с АРТ в течение 5 лет. По сравнению с 20-летними мужчинами с подавлением вируса у тех, у кого нет вирусного подавления, ожидаемая продолжительность жизни была на 11 и 16 лет короче после 1 и 5 лет АРТ соответственно.

При начале АРТ 20-летние мужчины с числом лимфоцитов CD4 + менее 200, 200-349, по меньшей мере 350 клеток / мкл, по оценкам, живут в среднем до 65 (61-68), 74 (69-79) и 72 (67-77) лет соответственно. Через 5 лет после АРТ ожидаемый возраст смерти составлял 50 (38-63), 72 (64-79) и 75 (70-81) лет в зависимости от того, было ли достигнуто количество лимфоцитов CD4 меньше 200, 200-349 или менее 350 клеток / мкл, соответственно (дополнительная таблица 7). Образцы для женщин были похожи (данные не показаны).

Успешно обработанные пациенты, которые добились подавления вируса и достигли количества лимфоцитов CD4 +, по меньшей мере, 350 клеток / мкл в течение 1 года после начала АРТ, имели нормальную продолжительность жизни, при этом 35-летний ВИЧ-положительный человек, по оценкам, прожил до 80 лет в среднем. Пациенты с числом лимфоцитов CD4 + менее 200 клеток / мкл, до или после начала АРТ, подвергались повышенному риску смерти: разница в ожидаемой продолжительности жизни между теми, у кого было достигнуто количество лимфоцитов CD4 + менее 200, по сравнению с по меньшей мере 200 клетками / мкл было 8 лет в начале АРТ и расширилось с продолжительностью АРТ. Хотя большая часть эффекта подавления вируса на снижение смертности, вероятно, опосредуется путем увеличения количества лимфоцитов CD4 +, тем не менее сохраняется независимый эффект обнаруживаемой вирусной нагрузки на продолжительность жизни. Те, у которых количество лимфоцитов CD4 + менее 200 клеток / мкл через 5 лет после начала АРТ, потеряли от 15 до 26 потенциальных лет жизни в зависимости от того, были ли они или не были подавлены вирусом.

Мы проанализировали данные о более чем 20 000 пациентов на АРТ, среди которых было около тысячи смертей. Наше исследование было основано на когорте, которая включала приблизительно 34% пациентов в обычном уходе за ВИЧ-инфекцией в Великобритании, и поэтому наши оценки ожидаемого возраста при смерти должны быть применимы к пациентам с АРТ в Великобритании. В 2012-2013 гг. UK CHIC провела обширную связь с базами данных, проводимыми в Public Health England (PHE), для проверки достоверности сообщений о смертности со стороны участвующих больничных клиник и включения случаев смерти, пропавших без вести в клиниках на ВИЧ (около 16% всех смертей) , о которых сообщалось в гражданском регистре смерти Великобритании. Поэтому полнота установления смерти должна быть высокой [11]. Однако, поскольку многие пациенты были потеряны для наблюдения, остается вероятность пропущенных смертей, что приведет к смещению оценок ожидаемого возраста при смерти вверх. Как и ожидалось, пациенты, потерявшие контроль, чаще имели характеристики, связанные с мигрантами, и некоторые из них, возможно, вернулись в свою страну происхождения, когда АРТ более широко распространена, особенно в странах Африки к югу от Сахары. Анализ тех, кто был потерян для наблюдения, был неубедительным в определении того, могут ли потерянные пациенты иметь более низкую или более высокую смертность, чем те, которые остаются на попечении. Причины потерь для последующего наблюдения разнообразны, а также в том числе отказ от ухода и депортации также включают передачу помощи другому поставщику АРТ либо в Великобританию, но не вносить вклад в UK CHIC или за границу. Несмотря на наличие некоторых доказательств того, что по сравнению с теми, кто остался в исследовании, те, кто выбывал, были более болезненными (положительная связь с диагнозом СПИДа), другие ассоциации подразумевали, что колодец также был потерян для наблюдения (младший и имеющий более высокий Количество лимфоцитов CD4 +). Как и во французском исследовании [12], мужчины чаще теряются, чем женщины, что может быть связано с тем, что мужчины являются более мобильным населением. В каждый рассматриваемый период времени могут быть включены только пациенты с данными о количестве лимфоцитов CD4 и вирусной нагрузке, что привело к тому, что около 10% пациентов были исключены из каждой модели. Поэтому наши результаты могут быть применимы только к пациентам, оставшимся в регулярной медицинской помощи в Великобритании, но это будет большинство ВИЧ-положительных людей в континууме ухода [13]. В наших оценках ожидаемой продолжительности жизни использовались только возрастные и гендерно-скорректированные оценки смертности, которые были стратифицированы путем ответа на АРТ, определяемые достижением количества клеток CD4 + и статуса подавления вируса. В прогностических моделях использовался более широкий диапазон переменных, включая биомаркеры, не связанные с ВИЧ, которые нацелены на определение краткосрочного прогноза, а скорее cancy [7,14-17].

Читать еще:  Можно ли на УЗИ увидеть,сильное воспаление и фиброз печени и поджелудочной.

Предполагаемая продолжительность жизни может быть смещена экстраполяцией за пределы доступных данных. Было несколько пациентов в возрасте более 60 лет (

"CD4+ Т-лимфоциты, % и абсолютное количество (Т-хелперы, CD4+ T-cells, Percent and Absolute)"

Исследование включает в себя определение абсолютного и относительного количества CD4+ Т-лимфоцитов (Т-хелперы). Рекомендуется к назначению для контроля показателей клеточного звена иммунной системы в динамике после комплексного иммунологического обследования.

Синонимы русские

Иммунофенотипирование, клеточный иммунитет, многоцветный клеточный анализ методом проточной цитометрии, Т-клетки, Т-лимфоциты, Т-хелперы.

Синонимы английские

Human Immune System, Immunophenotyping, Multicolor Flow Cytometry Cell Analysis, Human Leukocyte Differentiation Antigens, Human T cells, T helper cells.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
  • Детям в возрасте до 1 года не принимать пищу в течение 30-40 минут до исследования.
  • Детям в возрасте от 1 до 5 лет не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования.
  • Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
  • Полностью исключить (по согласованию с врачом) прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием.
  • Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 24 часов до исследования.
  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Оценка клеточного состава (иммунофенотипирование) лимфоцитов крови человека — основной компонент в оценке иммунного статуса — выполняется методом проточной цитофлуориметрии.

Иммунофенотипирование — характеристика клеток при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.

Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития. CD антигены (англ. cluster of differentiation antigens) — это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флюоресцентно-меченые моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии произвести подсчёт содержания лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.

В основе проточной цитофлуориметрии лежит проведение фотометрических и флюоресцентных измерений отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.

Использование МКА к CD4 антигену дает возможность количественно охарактеризовать особый клон клеток, получивших название Т-хелперов/индукторов. СD4+ клетки в функциональном отношении делятся на два вида хелперных лимфоцитов: Т-хелперы 1-го порядка (Th1-клетки) и 2-го порядка (Th2-клетки). Различные CD4+ Т-клетки продуцируют разные наборы цитокинов. Th1-клетки (их называют еще клетками гиперчувствительности замедленного типа – ГЗТ) – цитокины для клеточного иммунного ответа: интерлейкин 2 (IL-2), IL-3, g-IFN, TNF-a, TNF-b, среди которых дискриминантным цитокином является g-IFN. Th2 секретируют набор цитокинов, необходимый для гуморального иммунного ответа — IL-3, 4, 5, 6, 10, 13, TNF-b, — среди которых дискриминантным цитокином является IL-4.

Определение количества CD4+ клеток имеет значение в диагностике состояний, связанных с дефектами антителопродукции, и реакций клеточно-опосредованного иммунитета. Показателю числа CD4+ клеток отводится решающая роль для прогноза течения ВИЧ-инфекции.

Функциональное состояние CD4+ лимфоцитов тестируют по цитокиновому профилю: функциональная полноценность Th1-клеток подтверждается по секреции g-IFN, а Th2-клеток – по секреции IL-4.

Метод позволяет определить количество популяции Т-лимфоцитов:

  • Т-хелперы/индукторы ( CD4 + CD45 + ).

Когда назначается исследование?

Рекомендовано для комплексного обследования пациентов, входящих в группу риска по четырем основным иммунопатологическим синдромам.

С инфекционным синдромом:

  • частые ОРВИ, хронические инфекции ЛОР-органов (гнойные синуситы, отиты, периодически встречающиеся лимфадениты, пневмонии с тенденцией к рецидивированию, бронхоплевропневмонии);
  • бактериальные инфекции кожи и подкожной клетчатки (пиодермии, фурункулез, абсцессы, флегмоны, септические гранулемы, рецидивирующий парапроктит у взрослых);
  • урогенитальные инфекции;
  • грибковые поражения кожи и слизистых оболочек, кандидоз, паразитарные инвазии;
  • рецидивирующий герпес различной локализации;
  • гастроэнтеропатия с хронической диареей неясной этиологии, дисбактериозом;
  • длительный субфебрилитет, лихорадка неясной этиологии;
  • генерализованные инфекции (сепсис, гнойные менингиты).

С аллергическим (атопическим) синдромом:

  • атопический дерматит;
  • нейродермит;
  • экзема с инфекционным компонентом;
  • тяжелая атопическая бронхиальная астма, поллиноз, хронический астматический бронхит.

С аутоиммунным синдромом:

  • ревматоидный артрит;
  • рассеянный склероз;
  • диффузные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, дерматомиозит);
  • аутоиммунный тиреоидит;
  • неспецифический язвенный колит.

С иммунопролиферативным синдромом:

  • опухолевые процессы в иммунной системе (лимфомы, болезнь Ходжкина, острый и хронический лимфолейкоз, саркома Капоши).

Что означают результаты?

Изменения различных клеточных популяций лимфоцитов в сторону повышения или понижения развиваются при различных патологических процессах в организме, таких как инфекции, аутоиммунные и онкологические заболевания, иммунодефициты, в постоперационном периоде, при трансплантации органов.

Ниже представлена таблица с клиническими ситуациями, которые могут приводить к изменениям в субпопуляционном составе лимфоцитов.

Субпопуляция лимфоцитов

Повышение показателя

Снижение показателя

  • Ряд аутоиммунных заболеваний;
  • гормональный дисбаланс;
  • некоторые инфекции;
  • отдельные Т-клеточные лейкозы;
  • отравление солями бериллия.
  • Иммунодефицитные состояния (основной лабораторный признак вторичного иммунодефицита);
  • алкогольная болезнь печени;
  • аутоиммунные заболевания;
  • прием иммуносупрессивных препаратов или стероидов.

В совокупности с клиническими данными, симптоматикой, другими методами лабораторных исследований вышеуказанные изменения являются диагностическим признаком возникновения этих патологических процессов в организме человека.

Оценка показателей клеточного иммунитета

Первым этапом лабораторной диагностики является количественная оценка клеток периферической крови и их морфологических элементов — подсчет лейкоцитарной формулы. При этом анализе следует обращать внимание не только на относительное, но и на абсолютное число клеток крови.

Количество лейкоцитов и других клеток крови зависит от скорости выхода клеток из костного мозга и притока их в ткани. Число лейкоцитов в периферической крови выше 10И09 клеток/л определяется как лейкоцитоз, ниже 4*109 кл./л — как лейкопения. Основные причины лейкоцитоза — все виды инфекций, воспалительные состояния, злокачественные новообразования, травмы, лейкозы, уремия, действия адреналина и стероидных гормонов. Лейкопения встречается при аплазии и гипоплазии красного костного мозга, гиперспленизме, острых лейкозах, миелофиброзах, плазмоцитомах, метастазах новообразования в костный мозг, тяжелых инфекциях, коллагенозах (неблагоприятный признак), под действием лекарственных средств.

Известны различные отклонения лейкоцитарной формулы, которые могут свидетельствовать в комплексе с другими лабораторными данными о различных патологических состояниях.

Лейкоцитоз со сдвигом влево может наблюдаться при бактериальных инфекциях (неспецифических и специфических), интоксикациях (отравлении угарным газом, грибами и пр.), коматозных состояниях (уремия, диабетическая, печеночная и др.), после острых кровопотерь, во время гемолитического криза. Так же выявляется на ранних этапах послеоперационного периода, после больших хирургических вмешательств, во время и после родов, при злокачественных новообразованиях, лейкозах, лучевой болезни (на ранней фазе массивного радиационного поражения).

Лейкоцитоз со сдвигом вправо может наблюдаться при вирусных и хронических бактериальных (туберкулез, сифилис, бруцеллез и пр.) инфекциях, дефиците фолиевой кислоты, лучевой болезни, сепсисе.

Нейтропения обычно сочетается с лейкопенией при тяжелых и вирусных инфекциях, аутоиммунных и лекарственных лейкопениях, Bi2- дефицитных анемиях, гипоксии, голодании, авитаминозе.

Эозинофилия выявляется при аллергических заболеваниях (бронхиальной астме, лекарственной аллергии и др.), глистной инвазии, кожных, аутоиммунных и инфекционных заболеваниях в период развития клинической картины и на этапе выздоровления, при злокачественных новообразованиях, при лимфогранулематозе.

Эозинопения имеет место при стрессовых ситуациях, острых инфекциях, интоксикациях, шоке, инфаркте миокарда.

Читать еще:  Диафрагма в качестве метода котрацепции

Базофилия встречается при лечении гепарином, введении сыворотки, диабете, микседеме, нефрозе, в предменструальный период, при аутоиммунной тромбоцитопении, хроническом миелолейкозе, миелофиброзе, эритремии.

Абсолютный лимфоцитоз наблюдается у детей до 4 лет как физиологическое состояние. У взрослых увеличение числа лимфоцитов наблюдается при инфекционных заболеваниях вирусной этиологии, при хроническом лейкозе.

Лимфопения обнаруживается при лучевой болезни, СПИДе, хроническом алейкемическом миелолейкозе.

Моноцитопения — при тяжелых гипертоксических формах брюшного тифа и других инфекционных заболеваниях и является одним из признаков нарушения процессов регенерации.

Моноцитоз — при ревматизме, особенно в период обострения, бруцеллезе, сифилисе, туберкулезе, инфекционном мононуклеозе, может наблюдаться у новорожденных детей.

Появление в периферической крови плазматических клеток свидетельствует о напряженности иммунного процесса, например при детских инфекциях (корь, краснуха, паротит, инфекционный мононуклеоз), у взрослых — при ОРВИ, гриппе, лучевой болезни, лейкозах, гепатите.

Более подробно оценить клеточный состав можно при дополнительных исследованиях, и, прежде всего, используя методы проточной лазерной цитометрии.

Область применения проточной цитометрии весьма разнообразна. Помимо морфологических характеристик клеток с помощью моноклональных антител можно достоверно определять популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов, выявлять стадию дифференцировки и активации клеток, оценивать уровень функциональной активности лимфоцитов, определять внутриклеточные и секретируемые цитокины, проводить исследования фагоцитоза, анализировать клеточный цикл, оценивать апоптоз и пролиферацию. Основные популяции лимфоцитов периферической крови здоровых лиц представлены в табл 3.2. Эти показатели можно считать нормативными при проведении иммунологических исследований.

Снижение абсолютного количества Т-лимфоцитов свидетельствует о недостаточности клеточного иммунитета (недостаточность клеточно- эффекторного звена иммунитета).

ственных опухолях, в постоперационный период, при инфаркте и т.д. Повышение числа Т-лимфоцитов в динамике заболевания — клинически благоприятный признак. Полное завершение болезни обычно сопровождается и нормализацией количества Т-лимфоцитов.

Увеличение абсолютного числа CD4+-лимфоцитов свидетельствует о стимуляции иммунной системы на какой-либо антиген и служит подтверждением гиперреактивных синдромов. Однако необходимо иметь в виду, что их увеличение — чаще всего не что иное, как нормальная физиологическая реакция на антиген, что мы и наблюдаем при специфических и неспецифических инфекционных заболеваниях. Пролиферация CD4+T- лимфоцитов продолжается 3-5 сут после активации. Она обеспечивает умножение численности клеток в клонах, вовлекаемых в иммунный ответ — пролиферативную экспансию клонов. Т-клетки проходят 6-8 делений, что обеспечивает увеличение их числа примерно в 100-200 раз. Так, если исходную численность Т-клеток в клоне можно оценить у человека примерно в 2^10 (исходя из оценки общего числа Т-хелперов — в 7×10 и

возможного числа клонов — в 3×10 ), то после пролиферации их число может превысить 106. Это обеспечивает должную эффективность иммунного ответа, поскольку формирование активных Т-хелперов необходимо для успешной реализации практически всех его ветвей. Снижение числа Т- хелперов свидетельствует о гипореактивном синдроме с нарушением регуляторного звена иммунитета. Особенно наглядно это определяется при ВИЧ-инфекции.

Повышение количества цитотоксических Т-лимфоцитов определяется практически при всех вирусных, бактериальных, протозойных инфекциях. Относительное увеличение числа CD8+-клеток обычно обусловлено уменьшением количества Т-хелперов, хотя такую закономерность наблюдают не всегда. Это связано с тем, что цитотоксические Т-лимфоциты синтезируют ИФН-у, который угнетает пролиферацию T^-клеток, и с тем, что ранее CD8+-лимфоциты расценивались как Т-супрессоры.

Количество В-лимфоцитов в периферической крови определяется с помощью CD^-маркера, который присутствует на всех В-клетках периферической крови, но отсутствует на плазматических клетках.

NK-лимфоциты с диагностической точки зрения имеют два важных CD-маркера — 16 и 56. Общее количество их в крови составляет: CD16+- клеток — 6-26 %, CD56+-клеток — 7-31% (0,09-0,6×10%). Снижение количества этих клеток — патогномоничный признак клеточно-эффекторного иммунодефицита, обусловленный тяжестью течения онкологических и вирусных инфекций, наблюдается и при приеме иммунодепрессантов. Увеличение количества NK-клеток связано с активацией антитрансплантационного иммунитета, в некоторых случаях отмечается при бронхиальной астме, т.е. является патогномоничным признаком клеточноопосредованной цитотоксичности.

На сегодняшний день теряет свой клинический смысл, так называемый ранее регуляторный (дифференцировочный) индекс — соотношение CD4+- и CD8+-лимфоцитов. Считается, что значение этого индекса ниже 1,0 соответствует иммунодефициту, более 2,5 — гиперактивности. С современных позиций интерпретировать этот показатель таким образом в настоящее время будет неправильно. Более информативным для таких выводов служит абсолютное число субпопуляций Т-лимфоцитов и маркеры активации.

Проявлением активации служит экспрессия на клетках различных маркеров активации. Так, на Т-лимфоцитах после действия стимуляции уже через 2-3 ч на поверхности появляется CD69 — самый ранний активационный антиген, частично мобилизуемый из внутриклеточных депо, а частично экспрессируемый de novo. Его экспрессия продолжается немногим более суток. Вскоре после CD69 на поверхности клетки появляется другой ранний маркер активации — CD25. Следующие проявления активации наблюдают через сутки после действия стимулятора, когда экспрессируется молекула рецептора для трансферрина (CD71).

О функциональном состоянии Т-лимфоцитов свидетельствует количество клеток, экспрессирующих рецепторов к ИЛ-2 (CD25+-лимфоциты). В норме в крови их относительное число составляет 13-24 %. При гиперреактивных синдромах количество этих клеток возрастает, при иммунодефицитах — снижается. Показателем гиперреактивности иммунитета является также количество лимфоцитов, несущих два рецептора — CD3 и HLA- DR. В норме их должно быть не более 12 %.

В настоящее время типируются и другие маркеры, их сейчас насчитывается около 263 разновидностей. Особенно это важно в онкогематологии для уточнения диагноза.

Помимо определения количественного состава клеток иммунной системы очень важно дать качественную характеристику их функциональной активности. Благодаря применяемой в последнее время многоцветной проточной цитометрии, по наличию тех или иных рецепторов можно оценить функциональную активность клеток. С клинической точки зрения наиболее важны следующие рецепторы:

CD5 — молекула адгезии, регулирует активацию клеток. Определяется на Т-лимфоцитах, тимоцитах, В1-клоне В-клеток;

CD11b — относится к наиболее важным для миграции клеток инте- гринам, которые определяют активность фагоцитоза, клеточной цитотоксичности, хемотаксиса и клеточной активации Т-эффекторов, NK-клеток, макрофагов и гранулоцитов;

CD16 — является рецептором Fc-фрагмента IgG, опосредует фагоцитоз и антителозависимую клеточную цитотоксичность, при его активации усиливается цитотоксичность NK-клеток, стимулируется секреция интерферона и фактора некроза опухоли;

CD23 — экспрессируется на активированных В клетках, макрофагах, клетках тимического эпителия, эозинофилах, тромбоцитах. Показатель активности В-клеток.

CD25 — a-цепь рецептора ИЛ2. Экспрессируется на различных типах клеток периферической крови: CD4+-, CD8+-, NK-лимфоцитах, NKT- клетках, В-лимфоцитах, моноцитах. Маркер ранней активации Т- лимфоцитов. Повышение их количества, также как и общей популяции CD25-позитивных лимфоцитов, может свидетельствовать о воспалительном процессе любой природы (инфекционный, аутоиммунный);

CD27 — дополнительный маркер В2-лимфоцитов. Указывает на переход В-лимфоцитов из наивных клеток в клетки памяти;

CD28 — экспрессируется на большинстве активированных Т- лимфоцитах, NK-клетках и плазматических клетках. Необходим как ко- стимулирующий фактор для индукции иммунного ответа (пролиферации и активации клеток);

CD38 — циклическая АДФ-рибозилгидролаза, находится на поверхности лимфоцитов, обеспечивает адгезию, передачу сигнала, является так же маркером активации клеток (метаболический маркер). Понижается при ВИЧ-инфекции, лейкемии, миеломе, солидных опухолях, диабете II типа;

CD50 — межклеточная молекулы адгезии (ICAM-3), помимо этого является мощной сигнальной молекулой. Представлена на всех лейкоцитах, эндотелиальных и дендритных клетках. Обеспечивает костимулятор- ные сигналы для Т-клеток и регулирует адгезию клеток путем взаимодействия с интегринами. Показано снижение количества CD50+-клеток при опухолевых заболеваниях;

CD57 — экспрессируется на субпопуляциях 15-20% мононуклеарных клеток периферической крови, у 60% NK- и Т-клеток. Повышение показателей определяется у онкологических больных, больных после трансплантации, у пациентов с ВИЧ, а также с ревматоидным артритом и синдромом Фелти. Снижение патогномонично при хронизации болезни Лайма;

CD62L — представитель семейства молекул клеточной адгезии (L- селектин), находящийся на клеточной поверхности лейкоцитов (T- и NK- клетки, моноциты, гранулоциты), обеспечивает транслокацию лейкоцитов из крови в лимфоидную ткань, где они взаимодействуют с антигеном;

CD64 — посредник антителозависимой клеточной цитотоксичности (функциональный маркер);

CD158а — важный функциональный маркер NK-активности;

HLA-DR — экспрессируется различными клетками периферической крови. Определяется на всех В-лимфоцитах и моноцитах, на активированных Т-лимфоцитах (маркер поздней активации). Уровень экспрессии HLADR-рецептора на моноцитах менее 50 % является неблагоприятным пато- гномоничным признаком развития тяжелой бактериальной инфекции (сепсис, перитонит).

Для характеристики клеточного звена иммунной системы является важно определение концентрации цитокинов. Их идентификация в ряде случаев позволит более точно установить диагноз и механизм иммунного нарушения. Большое значение имеет определение таких провоспалительных цитокинов, как ФНО-а и -в, ИЛ-1 и ИФН-у, особенно в этиопатогенезе различных острых и хронических воспалительных процессов как инфекционной, так и аутоиммунной природы. Их повышенное образование — главная причина септического шока. При сепсисе уровень ФНО в крови может достигать 1 нг/мл. Накапливаются данные о роли провоспалительных цитокинов в этиопатогенезе неспецифического язвенного колита, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, инсулинзависимого диабета и др. Существенным является их определение у больных с соответствующим врожденным иммунодефицитом. И если раньше тесты на определение цитокинов были полезны только в научно-исследовательских целях, в настоящее время они становятся важными показателями для выявления течения заболевания и тактики лечения (особенно при применении методов цитокинотерапии).

Таким образом, лабораторное исследование состояния клеточного звена иммунной системы позволяет уточнить уровень нарушения иммунитета и в последующем проводить эффективную иммуноактивную терапию.

голоса
Рейтинг статьи
Ссылка на основную публикацию
ВсеИнструменты
Adblock
detector